jueves, 15 de enero de 2015

proceso de clonacion

Proceso de Clonación
 La clonación se da mediante un procedimiento complicado que comprende varias fases

1ª  etapa: preparacion del ADN El gen, fragmento de gen o fragmento de ADN que se quiere clonar debe ser aislado de la muestra. Rotura con endonucleasa de restricción y separación de fragmentos. 
2ª etapa: preparación del vector Como vector de clonación se puede utilizar un plásmido, Un cósmido, un virus... Su propiedad esencial es que sean autorepliegativos.
 3ª etapa: unión del ADN al vector Habiendo cortado el ADN y el vector con una misma endonucleasa de restricción, ambos pueden unirse gracias a una ligasa. 
4ª etapa: incorporación del ADNr El ADN recombinante se introduce en bacterias, empleando métodos diversos. El vector se replica al dividirse la bacteria y también de forma autónoma. Con ello, aumenta el número de copias. Cada bacteria, haya incorporado o no un vector y un ADN recombinante, se multiplica para dar lugar a un "clon", población de bacterias con idéntico material genético (incluido el recombinante) 
5ª y 6ª etapas (simultáneas): propagación celular y selección. No todas las bacterias han incorporado el DNA de interés formando parte del vector recombinante. Se seleccionan las que sí lo han hecho, normalmente cultivándolas en un medio con antibiótico, si en el vector se incluyó el gen de resistencia a ese antibiótico.

2 comentarios: